BCA蛋白浓度测定

原理：

蛋白质分子中肽键结构在碱性环境下能与 Cu²⁺生产络合物，并将 Cu²⁺还原成 Cu⁺，而BCA试剂可以特异性地与 Cu⁺结合，形成稳定的有颜色的复合物，并在562nm处有最大的光吸收值，该复合物颜色的深浅与蛋白质浓度成正比，可以根据吸收值的大小来测定蛋白的含量。

操作步骤：

以biosharp的BCA试剂盒为例。

标准曲线——参照试剂盒说明书，略。

准备：提前打开37℃温箱，酶标仪。

• 配制BCA工作液：根据待测蛋白样本个数，将试剂 A 和试剂 B 按照体积比 50:1 比例混合，配成相应体积 BCA 工作液。注意考虑损耗，如：有样本40个，最好以41个来配制。两者混合时会有沉淀形成，彻底混匀后沉淀消失。

• 取空白酶标板，根据待测蛋白样本个数，每孔加入19 µl PBS溶液。每孔加入待测蛋白1 µl，混匀。每孔加入200 µl BCA工作液，将板子放入37℃温箱。30 min后，测定562nm处的吸光值，记录读数，根据标准曲线计算浓度。